| Abstract | Cilj istraživanja:
NKG2D-receptor jedan je od glavnih aktivacijskih receptora na NK-stanicama koji igra
ključnu ulogu u imunološkom nadzoru tumora i virusnih infekcija. Mišji citomegalovirus
(MCMV) putem svojih proteina m145, m152, m155 i m138 regulira stanične ligande za NKG2Dreceptor:
MULT-1, H60 i članove obitelji RAE-1, te na taj način onemogućuje aktiviranje NKstanica
preko NKG2D-receptora. Polazna osnova za istraživanja u okviru ovog rada bila je
opažanje da je, usprkos mehanizmima za negativnu regulaciju staničnih liganada za ovaj
receptor, u nekih mišjih sojeva očuvan imunološki nadzor MCMV-a koji je ovisan o NKG2Dreceptoru.
Vođeni ovim nalazima cilj nam je bio utvrditi osjetljivost pojedinih liganada za
NKG2D-receptor te objasniti molekularne mehanizme za njihovu regulaciju tijekom MCMVinfekcije.
Imajući u vidu razlike u ekspresiji pojedinih NKG2D liganada, ova su istraživanja
nadalje imala za cilj potvrditi funkcijski značaj virusne regulacije NKG2D-liganada na
imunološki nadzor posredovan NK-stanicama.
Metode:
Da bi ostvarili cilj ovog istraživanja načinili smo nekoliko staničnih linija koje stabilno
izražavaju NKG2D-ligande iz obitelji RAE-1. Osim toga napravili smo ciljane mutacije nekih od
ovih proteina te nakon transfekcije priredili njima odgovarajuće stanične linije. Ove i druge
stanične linije bile su inficirane s divljim tipom MCMV-a kao i mutantama kojima nedostaju geni
za pojedine imunoregulacijske virusne proteine. Učinke infekcije na proteine iz obitelji RAE-1
pratili smo protočnom citometrijom, konfokalnom mikroskopijom, imunoprecipitacijom i
Westem blot tehnikom.
Rezultati:
Dobiveni rezultati da se NKG2D-ligandi iz obitelji RAE-1 proteina razlikuju s obzirom
na osjetljivost na negativnu regulaciju posredovanu MCMV-om. Za razliku od ostalih RAE-1
proteina površni RAE-1δ pokazao se otpornim na virusnu regulaciju. Nadalje, pokazali smo da
nedostatak aminokiselinskog slijeda PL WY (na poziciji 49-52) uvelike doprinosi stabilnosti
proteina RAE-1δ te njegovoj otpornosti na MCMV. Biokemijska istraživanja otkrila su da je
protein ml52, glavni MCMV inhibitor ne samo RAE-1 proteina i MHC molekula skupine I,
ipak u stanju zaustaviti sazrijevanje RAE-1δ kao i drugih RAE-1 proteina u ER/cis-Golgi
odjeljku, dok je zrela molekula RAE-1δ rezistentna na djelovanje virusa. Nadalje, pokazalo se da
je površinska forma RAE-lε proteina rezistentna na m 152 iako ovaj protein, za
razliku od RAE-1δ, potpuno nestaje s membrane inficiranih stanica. Upotrebom niza delecijskih
mutanti MCMV-a pokazali smo daje m138 glavni inhibitor površinske ekspresije RAE-lε.
Zaključak:
Rezultati ovoga rada potvrdili su i proširili spoznaje o važnosti virusne regulacije staničnih
liganada za NKG2D-receptor. Otpornost RAE-1δ na MCMV ukazuje na mogućnost
izmicanja virusnim imunosubverzivnim mehanizmima koji djeluju na imunološki nadzor ovisan
o NKG2D-receptoru. Imajući u vidu da protein RAE-1ε posjeduje afinitet za NKG2Dreceptor od svih RAE-1 obitelji, može se pretpostaviti da je MCMV tijekom evolucije
razvio dodatni mehanizam kako bi što uspješnije osujetio imunološki odgovor posredovan NKstanicama, ali i CD8+ limfocitima T. |
